細(xì)胞培養(yǎng)基大盤(pán)點(diǎn)

培養(yǎng)基主要有：天然細(xì)胞培養(yǎng)基、合成細(xì)胞培養(yǎng)基和無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基等。

天然細(xì)胞培養(yǎng)基是人們?cè)缙诓捎玫募?xì)胞培養(yǎng)基，直接取自于動(dòng)物組織提取液或體液，如血漿凝塊、血清、淋巴液、胚胎浸出液等。營(yíng)養(yǎng)價(jià)值高，但成分復(fù)雜，差異大、不穩(wěn)定，來(lái)源也受限制。水解乳蛋白和膠原是兩種較好的天然培養(yǎng)基，富含氨基酸。血清是天然培養(yǎng)基中有效的培養(yǎng)添加物，但其組成成分復(fù)雜，其中一些成分與功能不明確。血清的來(lái)源有胎牛血清、小牛或成牛血清、馬血清、雞血清、羊血清及人血清，廣泛應(yīng)用的為胎牛血清和小牛血清。

合成細(xì)胞培養(yǎng)基是用化學(xué)成分明確的試劑配制的培養(yǎng)基，組分穩(wěn)定，主要包括糖類(lèi)、必需氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)鹽類(lèi)等。1950年，Morgan成功研制出具有確定化學(xué)成分的細(xì)胞培養(yǎng)液，即M199培養(yǎng)基，可用于培養(yǎng)多種種屬來(lái)源的細(xì)胞。1951年，Harry Eagle研發(fā)了動(dòng)物細(xì)胞體外生長(zhǎng)的人工合成培養(yǎng)基，即Eagle's minimum essential medium基(MEM培養(yǎng)基)，是目前使用廣泛的合成細(xì)胞培養(yǎng)基之一。合成細(xì)胞培養(yǎng)基發(fā)展至今已有幾十種，除了沿用半個(gè)世紀(jì)的基礎(chǔ)合成細(xì)胞培養(yǎng)基之外，近年來(lái)還出現(xiàn)了營(yíng)養(yǎng)成分更加豐富的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基。

在細(xì)胞培養(yǎng)中，需要根據(jù)細(xì)胞種類(lèi)和培養(yǎng)條件的不同選擇合適的合成細(xì)胞培養(yǎng)基。目前，在動(dòng)物細(xì)胞培養(yǎng)中常用的基礎(chǔ)細(xì)胞培養(yǎng)基有BME、MEM、DMEM、RPMI-1640、Ham F12、M199 等。由于天然培養(yǎng)基的一些營(yíng)養(yǎng)成分不能被合成細(xì)胞培養(yǎng)基*代替，因此一般需在合成細(xì)胞培養(yǎng)基中添加5％～10％的胎牛血清。胎牛血清的加入對(duì)細(xì)胞培養(yǎng)非常有效，但胎牛血清的成分復(fù)雜，這對(duì)培養(yǎng)產(chǎn)物的分離、純化和檢測(cè)會(huì)帶來(lái)一定的不便，為減少胎牛血清的影響，開(kāi)發(fā)了營(yíng)養(yǎng)成分更加豐富的低血清細(xì)胞培養(yǎng)基，可以將胎牛血清的使用量降低到1～3％。

無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基（serum free medium， SFM）是指在使用中無(wú)需添加血清的細(xì)胞培養(yǎng)基，且其組成成分不含有任何動(dòng)物組分。按照其組分分類(lèi)，還可以分為無(wú)動(dòng)物組分無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基和化學(xué)限定無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基，前者組分中可能含有某些植物來(lái)源成分，而后者*由化學(xué)成分明確的組分組成。

其中，無(wú)動(dòng)物組分無(wú)血清細(xì)胞培養(yǎng)基是目前在生物制藥行業(yè)中應(yīng)用廣泛的，它提高了細(xì)胞培養(yǎng)的質(zhì)量，避免了使用血清帶來(lái)的麻煩。目前，已有多種無(wú)血清培養(yǎng)基上市，如雜交瘤細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、CHO細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基、Vero細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基和NS0 細(xì)胞無(wú)血清培養(yǎng)基等。無(wú)血清培養(yǎng)基通常添加生長(zhǎng)附加成分，如激素與生長(zhǎng)因子、低分子營(yíng)養(yǎng)成分和轉(zhuǎn)鐵蛋白等促細(xì)胞生長(zhǎng)的附加成分，一般包括胰島素、孕酮、sodium selenate、腐胺、轉(zhuǎn)鐵蛋白等。

血清：用于細(xì)胞培養(yǎng)的血清主要是牛血清，培養(yǎng)某些特殊細(xì)胞也用人血清、馬血清等。選擇用牛血清培養(yǎng)細(xì)胞的原因主要是來(lái)源充足、制備技術(shù)成熟、經(jīng)過(guò)長(zhǎng)期的實(shí)際應(yīng)用人們對(duì)其有比較深入的理解。

牛血清可分為胎牛血清、新牛血清、小牛血清。胎牛血清應(yīng)取自剖腹產(chǎn)的胎牛。新牛血清取自出生24小時(shí)之內(nèi)的新生牛。小牛血清取自出生10～30 天的小牛。其中，胎牛血清品質(zhì)好是因?yàn)樘ヅ＿€未接觸外界，血清中所含的抗體、補(bǔ)體等對(duì)細(xì)胞有害的成分最少。牛血清對(duì)絕大多數(shù)哺乳動(dòng)物細(xì)胞都是適合的，但并不排除在培養(yǎng)某種細(xì)胞時(shí)使用其他動(dòng)物血清更合適。牛血清中含有豐富的細(xì)胞生長(zhǎng)必須的營(yíng)養(yǎng)成份，具有極為重要的功能。

血清的主要作用：1) 提供基本營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)：氨基酸、維生素、無(wú)機(jī)物、脂類(lèi)物質(zhì)、核酸衍生物等，是細(xì)胞生長(zhǎng)必須的物質(zhì)。2) 提供激素和各種生長(zhǎng)因子：胰島素、腎上腺皮質(zhì)激素（Cortisol、地塞米松）、類(lèi)固醇激素（雌二醇、睪酮、孕酮）等。生長(zhǎng)因子如成纖維細(xì)胞生長(zhǎng)因子、表皮生長(zhǎng)因子、血小板生長(zhǎng)因子等。3) 提供結(jié)合蛋白：結(jié)合蛋白作用是攜帶重要的低分子量物質(zhì)，如白蛋白攜帶維生素、脂肪、以及激素等，轉(zhuǎn)鐵蛋白攜帶鐵。結(jié)合蛋白在細(xì)胞代謝過(guò)程中起重要作用。4) 提供促接觸和伸展因子使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷，對(duì)培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。

血清的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)：血清是非常復(fù)雜的混合物，成分多樣，含有各種生理平衡的分子量差別很大的生物分子，有的對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)有促進(jìn)作用，如含有攜帶激素、礦物質(zhì)、微量元素和脂類(lèi)物質(zhì)的轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白等。血清能夠提供細(xì)胞貼壁因子和擴(kuò)散因子。血清中含有起穩(wěn)定作用和解毒的因子，能夠維持培養(yǎng)基的pH 值并抑制蛋白酶直接或間接的酶解。

但是，血清的加入也帶來(lái)了很多問(wèn)題：1) 血清的成份可能有幾百種之多，目前對(duì)其準(zhǔn)確的成份、含量及其作用機(jī)制仍不清楚，尤其是對(duì)其中一些多肽類(lèi)生長(zhǎng)因子、激素和脂類(lèi)等尚未充分認(rèn)識(shí)，這給研究工作帶來(lái)許多困難。2) 血清都是批量生產(chǎn)，各批量之間差異很大，而且血清保存期至多一年，因此，要保證每批血清的相似性極為困難，從而使實(shí)驗(yàn)的標(biāo)準(zhǔn)化和連續(xù)性受到限制。3) 不能排除血清中含有易變物質(zhì)。4) 對(duì)大多數(shù)細(xì)胞，在體內(nèi)狀態(tài)，血清不是它們接觸的生理學(xué)液體，只是在損傷愈合以及血液凝固過(guò)程中才接觸血清，因此使用血清有可能改變某種細(xì)胞在體內(nèi)的正常狀態(tài)，血清可能促進(jìn)某些細(xì)胞的生長(zhǎng)（成纖維細(xì)胞）同時(shí)抑制另一類(lèi)細(xì)胞生長(zhǎng)（表皮細(xì)胞）。5) 血清含一些對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生毒性的物質(zhì)，如多胺氧化酶，能與來(lái)自高度繁殖細(xì)胞的多胺反應(yīng)（如精胺、亞精胺）形成有細(xì)胞毒性作用的聚精胺。補(bǔ)體、抗體、細(xì)菌毒素等都會(huì)影響細(xì)胞生長(zhǎng)，甚至造成細(xì)胞死亡。6) 取材中可能帶入支原體、病毒，對(duì)細(xì)胞產(chǎn)生潛在影響。7) 血清的使用使得實(shí)驗(yàn)和生產(chǎn)的標(biāo)準(zhǔn)化困難，其中的蛋白質(zhì)使得某些轉(zhuǎn)基因蛋白生物藥品生產(chǎn)中分離純化工作很難完成。8) 大規(guī)模生產(chǎn)中，血清來(lái)源越來(lái)越困難，價(jià)格昂貴，是構(gòu)成生產(chǎn)成本的主要部分之一。9) 為了使與傳染源相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)減少到minimum，存在多個(gè)國(guó)家間限制進(jìn)出口生物材料的國(guó)際法規(guī)。