細(xì)胞凋亡檢測(cè)的常用檢測(cè)方法有這幾種

　　要了解細(xì)胞凋亡檢測(cè)方法，首先要了解細(xì)胞凋亡的形態(tài)學(xué)變化，形態(tài)學(xué)觀察表明細(xì)胞凋亡的變化是多階段的。細(xì)胞凋亡往往涉及多個(gè)細(xì)胞，甚至少數(shù)細(xì)胞也異步發(fā)生。首先細(xì)胞體積縮小，連接消失，與周?chē)?xì)胞分離，然后細(xì)胞質(zhì)密度增加，隨后會(huì)發(fā)生一系列變化：線粒體膜電位消失；滲透率變化；將細(xì)胞c釋放到細(xì)胞質(zhì)中；核質(zhì)濃度、核膜和核仁碎裂；DNA被降解成180bp-200bp左右的片段，在細(xì)胞膜內(nèi)形成囊泡；絲氨酸膜表面轉(zhuǎn)向磷脂膜內(nèi)側(cè)；細(xì)胞膜結(jié)構(gòu)仍然完好無(wú)損?？梢詫⒌蛲黾?xì)胞的殘骸分割包裹成若干個(gè)凋亡小體而不會(huì)溢出。

　　

　　細(xì)胞凋亡檢測(cè)通常包括形態(tài)學(xué)觀察、DNA凝膠電泳、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）、核小體試驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)和Westernblot檢測(cè)。

　　

　　1、形態(tài)觀察

　　

　　電鏡觀察：可見(jiàn)凋亡細(xì)胞表面微絨毛消失，核染色質(zhì)固縮和邊緣聚集，常呈新月形，核膜皺縮，細(xì)胞質(zhì)致密，細(xì)胞器集中，膜泡或“芽”和凋亡小體和凋亡小體被相鄰的吞噬細(xì)胞吞噬。

　　

　　2、DNA凝膠電泳

　　

　　細(xì)胞凋亡的主要生化特征是染色質(zhì)凝聚。染色質(zhì)DNA在核小體單元之間的連接處斷裂，形成一個(gè)180~200bp的整數(shù)寡核苷酸片段。該方法是判斷細(xì)胞是否發(fā)生凋亡的簡(jiǎn)單方法，更適用于體外培養(yǎng)的非增殖細(xì)胞的檢測(cè)。

　　

　　3、酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）核小體試驗(yàn)

　　

　　凋亡細(xì)胞的DNA斷裂導(dǎo)致細(xì)胞質(zhì)中出現(xiàn)核小體。核小體由組蛋白及其伴隨的DNA片段組成，可通過(guò)ELISA檢測(cè)。

　　

　　細(xì)胞凋亡檢測(cè)步驟：

　　

　?。?）將凋亡細(xì)胞裂解并高速離心，上清液中含有核小體；

　　

　　（2）微量定量板上吸附組蛋白；

　　

　?。?）此外，抗組蛋白抗體與核小體上的組蛋白結(jié)合；

　　

　?。?）辛辣過(guò)氧化物酶標(biāo)記的抗DNA抗體與核小體上的DNA結(jié)合；

　　

　?。?）酶加底物，光度吸收值。